细胞免疫荧光实验原理及其步骤（细胞免疫荧光常见问题）-小美百科

大家好，关于细胞免疫荧光实验原理及其步骤很多朋友都还不太明白，不知道是什么意思，那么今天我就来为大家分享一下关于细胞免疫荧光常见问题的相关知识，文章篇幅可能较长，还望大家耐心阅读，希望本篇文章对各位有所帮助！

1免疫染色的免疫染色实验方法和步骤

取材：尽量半小时内完成，因为动物死后半小时蛋白酶开始发挥作用。

Elivision二步法免疫组化染色步骤 1 石蜡印片脱蜡和水化后，用PBS(pH4)冲洗二次，每次3分钟(3x3min)2 根据每种抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复。

免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗结合，其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗，荧光显微镜下即可观察到荧光。

细胞免疫荧光的详细操作步骤1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。

实验室常用的染色方法有如下几种：（1）瑞氏染色法染色结果使组织细胞的胞浆和核染成不同颜色，菌体呈蓝紫色，易于识别。（2）革兰氏染色法可用于鉴别革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。

甲基绿：甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状，能溶於水（溶解度8%）和酒精（溶解度3%）。

预后预测等重要的病理学染色技术。PAS染色。又称过碘酸-雪夫染色，糖原染色。一般用来显示细胞内或细胞外的糖原和其他多糖物质。巴氏染色。是脱落细胞染色中最好的染色方法。

1、冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，于摇床。冰PBS洗一次，5分钟，于摇床。1DAPI染核，每皿1滴，完全覆盖住细胞即可。1 冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，于摇床。冰PBS洗一次，5分钟，于摇床。

2、细胞免疫荧光的详细操作步骤 1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。

3、参考见解：最好是同一视野在未用荧光激发下进行对照，看是否非特异性染色。(1)空白对照：如果你做的是石蜡切片免疫组化，这个对照必须有，目的是看自发荧光，脱蜡后直接在荧光显微镜下观察。

4、首先你应该确认老鼠是不是转基因老鼠，会不会有自发荧光的产生。其次，二抗就是荧光染料，只要加了二抗，就会有荧光的产生，所以需要在加完二抗后用PBS洗5次，充分将多余二抗洗掉，避免在拍片时产生躁点影响实验结果。

5、可导致细胞发生凋亡。且cyt2c本身就能诱导细胞凋亡。当在胞液或细胞核内加上外源性细胞色素C和ATP后就能引起细胞凋亡。也就是说如果直接向野生型细胞的胞质内注射细胞色素C，细胞极其有可能会凋亡。

6、定量是可以的，要做western blot和ELISA，但也只是相对定量，不是绝对定量，把你检测的结果保存一张比较好的图片，背景清晰，结果稳定的。

1、细胞免疫荧光步骤：细胞爬片；首先是玻片的处理，普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块，先用洗衣粉洗干净，用水冲静烤干，然后泡酸过夜，捞酸后流水洗净，烤干，置于器皿中高压灭菌，然后再烤箱中大约8小时烤干备用。

2、参考见解：最好是同一视野在未用荧光激发下进行对照，看是否非特异性染色。(1)空白对照：如果你做的是石蜡切片免疫组化，这个对照必须有，目的是看自发荧光，脱蜡后直接在荧光显微镜下观察。

3、细胞免疫荧光的详细操作步骤 1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。

4、少数实验需要使用这类细胞或者悬浮细胞进行免疫荧光观察，建议使用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片。（二）固定和通透除研究细胞表面抗原或不稳定抗原可不固定外，一般均应固定。

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