怎样做RNA的琼脂糖凝胶电泳（怎样做rna的琼脂糖凝胶电泳实验报告）-小美百科

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1琼脂糖凝胶电泳分离核酸分子的实验步骤大体有哪几步

操作步骤：电泳方法一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。

用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。（2）在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。

琼脂糖凝胶电泳是实验室常用的技术之一，广泛运用于DNA与RNA的鉴定和分离。

分子量较小的DNA分子比分子量较大的DNA分子迁移要快些。这就是应用凝胶电泳技术分离DNA片段的基本原理。大的DNA或者RNA分子通常利用琼脂糖凝胶电泳（agarosegelelectrophoresis）分离，也可以使用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）。

质粒DNA琼脂糖凝胶电泳中质粒超螺旋、开环、直链跑胶快慢次序依次是超螺旋、直链、开环。

胶液的制备：称取0.4g琼脂糖，置于200ml锥形瓶中，加入50ml 0.5×TBE稀释缓冲液，放入微波炉里（或电炉上）加热至琼脂糖全部熔化，取出摇匀，此为0.8%琼脂糖凝胶液。

1、制备1%琼脂糖凝胶（大胶用70ml，小胶用50ml）：称取0.7 g（0.5 g）琼脂糖置于锥形瓶中，加入70 ml（50ml）1×TAE，瓶口倒扣小烧杯，微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化，摇匀，即成0%琼脂糖凝胶液。

2、操作步骤：电泳方法一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。

3、百分之一。核酸染料在配置琼脂糖凝胶时融化至60℃时加入，是百分之一，比如称0.15克琼脂糖，加15毫升TAE，多一点。加入2ul的核酸染料。琼脂糖凝胶是以琼脂糖为支持介质制备的凝胶。

小心拔出梳子以后，用注射器针头（剪平尖部）吸取梳子齿形成的加样槽中的水，并修平加样槽底部的胶面。

更换电池泳液。根据查询光明网信息显示，rna跑胶降解严重是由于内部受到污染导致，需要更换电池泳液，重新配置浓度低的胶，提高电压进行解决。

RNA凝胶电泳 RNA的电泳目的是检测28S和18S条带的完整性和它们的比值，或者是mRNA Smear 的完整性，可以用普通的琼脂糖胶进行。

配法：先称取明胶溶于500—800ml DEPC水中，加热搅拌助溶，待明胶完全溶解以后，加入甲明矾溶解后即可使用。注意，包被玻片时，明胶液温度最好保持在60℃左右，效果最佳。方法同PLL包被玻片。

实验原理：SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。

凝胶电泳是通过电场作用将带负电荷的蛋白质样品在凝胶中进行分离的过程，在电场的作用下，带负电荷的蛋白质会向阳极迁移。

SDS—PAGE可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。本实验采用垂直板状不连续系统。所谓“不连续”指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、pH和凝胶孔径等所组成。

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